Рнк вируса гепатита с – часть вирусного генома или методы его диагностики

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это лабораторный метод определения ДНК и РНК. Впервые он был опробован почти полвека назад американцем Кэри Муллисом. Этот сверхчувствительный анализ способен определить носителя генома по одной исходной молекуле, содержащейся в крови, слюне или коже.

Метод ПЦР имеет огромные перспективы, находит применение не только в медицине, но и в генной инженерии, и в криминалистике. С его помощью клонируют и создают новые виды ДНК, определяют степень родства. По кусочку эпителия, найденного на месте преступления, устанавливают преступника.

Анализ ПЦР на гепатит – что это и зачем делают?

Почему необходим анализ ПЦР при подозрении на гепатит С, что это такое?

Вирус гепатита С – РНК содержащий вирус, имеет 6 генотипов и до 500 субтипов. Из всех гепатитов этот вирус обладает самой высокой мутационной способностью и преодолевает защитный барьер иммунной системы. Из общего числа заболевших гепатитами, вирус С стал причиной 70% случаев хронической формы и 30% цирроза и рака печени.

При болезнях печени нужно принимать..

• Специальный препарат, основанный, на натуральных веществах
• Цена на препарат
• Отзывы о лечении

Не является лекарством. Требуется консультация специалиста.

Эффективный способ очистки печени

1. Всего 1 раз в день, по 3 капли
2. Результаты лечения
3. Инструкция по применению

Не является лекарством. Требуется консультация специалиста.

Суть способа: часть исследуемого гена с помощью специальных ферментов и условий заставляют размножаться в пробирке. Анализ ПЦР позволяет определить штамм вируса, без которого невозможно провести результативное лечение: каждый генотип по-разному чувствителен к антивирусным препаратам. Применяется два типа ПЦР:

Важно! Найдено уникальное средство для борьбы с болезнями печени! Принимая его курсом можно всего за неделю победить почти любую болезнь печени! Читать далее >>>

• качественный;
• количественный.

Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.

Качественный и количественный ПЦР

ПЦР качественный на гепатит С дает ответ: есть ли в крови пациента штамм вируса С и какой именно. Генотипирование необходимо для уточнения диагноза, прогноза заболевания и определения сроков лечения.

По принятой классификации ген обозначается числом, а подтип маленькой латинской буквой.

Расшифровка таблицы генотипов вируса С:

• Генотип 1а, 1b, 1с
• Генотип 2а, 2b, 2с, 2 d
• Генотип 3а, 3b, 3с, 3d, 3e, 3f
• Генотип 4а, 4b, 4с, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
• Генотип 5 а
• Генотип 6 а

Самые распространенные генотипы 1,2,3. В России чаще всего встречаются 1а, 1b, 2 и 3 штаммы вируса С.

• Генотип вируса 1b труднее других поддается лечению, в 90% переходит в хроническую форму, из которых 30% перерождаются в рак или цирроз печени.
• Генотипы 2а и 3а имеют степень хронизации 33-50 %, более отзывчивы на противовирусную терапию.
• При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит С, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.

Расшифровка анализа

Качественный ПЦР анализ имеет два ответа:

• отрицательный;
• положительный.

ПЦР отрицательный означает, что возбудитель в образцах крови не обнаружен.
Положительный ответ свидетельствует об обратном: обнаружены РНК того или иного генотипа вируса С.

Вероятность достоверности результата равна 95%. Остальные 5% — это ошибка по вине человека. Такая возможность допускается из-за высоких требований к проведению исследования:

• правил хранения реактивов;
• соответствующей квалификации медперсонала;
• чистоты биоматериала.

Сам набор ПЦР имеет 100% диагностическую точность.

Количественный ПЦР РНК гепатита С позволяет определить вирусную нагрузку на организм больного. С его помощью:

• уточняется стадия заболевания (острая, хроническая);
• определяется эффективность противовирусного лечения;
• выясняется необходимость биопсии печени.

В некоторых случаях больной не ощущает никаких признаков болезни, в то время как методом ПЦР установлено инфицирование ВГС. Это означает, что заболевание находится на ранней стадии развития либо в хронической форме. Для уточнения диагноза необходимы дополнительные исследования, для скорейшего начала противовирусного лечения.

Вирусная нагрузка при гепатите С

Вирусная нагрузка показывает активность печеночного вируса, насколько активно происходит его размножение.

Что это?

ПЦР количественный гепатита С измеряется в Международных Единицах на 1 мл или МЕ/мл, что означает, сколько в 1 мл исследуемой крови обнаружено копий рибонуклеиновой кислоты определенного штамма вируса С.

Какая считается высокой, какая низкой?

Анализ на вирусную нагрузку позволяет определить наличие вирусных РНК в концентрации 50 МЕ/мл. Вирусная нагрузка в норме – это когда ПЦР не обнаружено ни одной молекулы РНК ВГС.

Таблица вирусной нагрузки:

• низкая – концентрация от 600 МЕ/мл 3*104 МЕ/мл;
• средняя – концентрация от 3*104 МЕ/мл до 8*105МЕмл;
• высокая – уровень более 8*105 МЕ/мл.

Низкая вирусная нагрузка – это сигнал, что терапевтическое лечение подобрано правильно, и прогноз на излечение от гепатита С – благоприятный.

Высокая концентрация вирусных клеток свидетельствует, что болезнь находится в острой фазе. Кровь пациента является опасным источником инфекции.

Вирусная нагрузка, показатели которой находятся на среднем уровне, характеризует либо хроническую стадию ГВС, либо может иметь два тренда развития: к ее повышению или понижению.

Внимание! Количественное тестирование проводится на протяжении всей антивирусной терапии: через 4, 12 и 24 недели, цель которой – снизить вирусную нагрузку.

По ее окончании – через 6 месяцев делается контрольная ПЦР.

Стоимость ПЦР диагностики

Для справки! Пройти диагностику на гепатит С или любое другое инфекционное заболевание можно по направлению врача или самостоятельно.

Поводом для беспокойства должны стать следующие симптомы:

• общая слабость;
• изменение цвета кожи, глазных склер, выделений;
• тошнота;
• снижение аппетита;
• боли в мышцах и суставах;
• тяжесть в правом подреберье;
• повышенный уровень в крови АСТ и АЛТ.

При контакте с инфицированными больными, в предоперационный период, при гемодиализе также рекомендовано обследование.

Государственные клиники делают анализ крови на ПЦР бесплатно, если имеется направление от инфекциониста или гепатолога.

Платные услуги по ПЦР диагностике оказывают во всех крупных российских городах. Стоимость зависит от типа теста, имеющегося оборудования, сроков проведения и других факторов.

Качественный ПЦР анализ в Москве и С-Петербурге обойдется от 600 до 900 руб. В регионах – от 300 до 800 руб.

Определение вирусной нагрузки гепатита С будет стоить 17000-22000 руб. Для прочих видов инфекции цена количественного исследования: 1200-10000 руб.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?

1. Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
2. Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
3. Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
4. Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
5. Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.

Недостатки ПЦР являются следствием ее достоинств:

• для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты, в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
• высокие требования к персоналу, осуществляющему забор и анализ биоматериала.

Источник: http://ZaPechen.ru/bolezni-pecheni/gepatit/c/ptsr-analiz.html

Что такое РНК вируса гепатита С?

Исследование РНК вируса гепатита С является наиважнейшей процедурой, которая позволяет с большой точностью устанавливать длительность и методы лечения больных.

Диагностика заболевания состоит из нескольких различных исследований крови, таких как:

• маркеры гепатита С (анти-HCV);
• определение РНК вируса гепатита С (РНК HCV).

Первое исследование делается при первом подозрении на гепатит. Второй вариант является наиболее значимым при лечении HCV РНК, поэтому рассмотрим его более подробно.

Что такое вирусный гепатит С?

Вирусный гепатит C, или HCV, это инфекционная болезнь, поражающая печень. Заражение вирусом происходит через кровь. Заразиться можно, делая переливание крови, когда не соблюдаются правила по стерилизации медицинских инструментов. Реже встречаются случаи, когда заболевание получается половым путем или от беременной матери к плоду. Гепатит С бывает 2-х типов.

Хронический гепатит С наиболее опасен. Это форма болезни, которая может длиться на протяжении всей жизни. Она приводит к серьезным проблемам функционирования печени, таким как цирроз либо рак. У 70-90% инфицированных людей болезнь переходит в хроническую стадию.

Важнейшая опасность гепатита С состоит в том, что он протекает скрытно, без желтушных признаков.

При этом чаще всего жалуются на поднятие температуры, тошноту и рвоту, физическую слабость, повышенную утомляемость, потерю аппетита и веса.

При этом на фоне небольшого уплотнения тканей печени достаточно часто происходит ее злокачественное перерождение. По этой причине вирусный гепатит С зачастую называют «бомбой замедленного действия» или «ласковым убийцей».

Другая особенность болезни заключается в очень медленном ее развитии, исчисляемом десятками лет.

Как правило, заразившиеся не ощущают никаких симптомов и не подозревают о своем истинном состоянии. Часто заболевание можно выявить только при обращении к врачу по другому вопросу.

К группе риска относятся:

• дети, получившие вирус гепатита С от матерей;
• наркоманы;
• люди, прокалывавшие части тела или сделавшие татуировки нестерильными инструментами;
• получившие донорскую кровь либо органы (до 1992 года, когда гемодиализ не проводился);
• лица, инфицированные ВИЧ;
• медицинские работники, контактирующие с инфицированными пациентами.

Определение РНК гепатита С

• Определение РНК вируса HCV-RNA, также именуемый ПЦР гепатита С, это исследование биологического материала (крови), с помощью которого можно определить в организме непосредственное наличие самого геноматериала вируса гепатита (любой отдельно взятый вирус является одной-единственной частичкой РНК).
• Основной метод проведения теста — ПЦР, или метод полимеразно-цепной реакции.
• Существуют два вида тестов крови на определение РНК HCV:

• качественный;
• количественный.

Качественный тест

Проведение качественного анализа дает возможность определить, находится ли вирус в составе крови. Все пациенты, у которых найдены антитела С-гепатита, должны пройти данный тест.

По его результатам можно получить 2 ответа: «присутствует» либо «отсутствует» вирус.

По положительному результату теста (обнаружено) можно судить об активном размножении вируса, который заражает здоровые клетки в печени.

Тест, проводимый на качественный ПЦР, настроен на конкретную чувствительность, от 10 до 500 МЕ/мл. Если обнаруженный в составе крови вирус гепатита при удельном содержании меньше 10 МЕ/мл, то обнаружение вируса может стать невозможным.

Очень низкое значение удельного содержания вируса наблюдается среди пациентов, для которых назначена противовирусная терапия.

Поэтому важным является тот факт, насколько высока чувствительность медицинской системы для диагностирования и постановки качественного результата при полимеразной цепной реакции.

Зачастую полимеразная цепная реакция C-гепатита проводится сразу же после нахождения соответствующих антител. Последующие тесты, при прохождении противовирусной терапии, проводятся на 4-ю, 12-ю и 24-ю недели. И еще один анализ после прекращения ПВТ делается через 24 недели. Затем — один раз в год.

Количественный тест

Количественный анализ ПЦР РНК, иногда называемый вирусной нагрузкой, определяет концентрацию (удельное содержание) вируса в составе крови. Другими словами, под вирусной нагрузкой понимается определенное количество вирусной РНК, которое может находиться в конкретном количестве крови (принято использовать 1 мл, равный 1 см в кубе).

Единицы измерения для результатов теста — международные (стандартные) единицы, разделенные на один миллилитр (МЕ/мл). Содержание вируса иногда представляется по-разному, это зависит от лабораторий, где проводятся исследования. Для гепатита С количественное определение иногда использует такие значения, как копии/мл.

Необходимо понимать, что нет никакой конкретной зависимости в степени тяжести гепатита С от концентрации данного штамма в составе крови.

Проверка «вирусной нагруженности» позволяет определить степень инфекционности заболевания. Так риск заразить вирусом другого человека повышается при повышении концентрации гепатита в составе крови. К тому же высокое содержание вируса снижает эффект от проводимого лечения. Поэтому малая вирусная нагрузка является очень благоприятным фактором для успешного лечения.

К тому же тест гепатита С и его определение методом ПЦР играют большую роль при применении терапии от болезни и определения успешности лечения. На основании результатов теста осуществляется планирование курса реабилитации. Например, при слишком медлительном уменьшении удельной концентрации вируса гепатита, противовирусная терапия продлевается, и наоборот.

В современной медицине считается, что нагрузка больше 800000 ME/мл является высокой. Нагрузка же сверх 10000000 ME/мл считается критической. Но у специалистов из разных стран и по сей день не появилось одинакового мнения о пределах вирусной нагрузки.

Частота проведения количественного теста

В общих случаях количественный анализ на гепатит HCV-RNA делается перед проведением противовирусной терапии и через 3 месяца по окончании лечебных процедур для определения качества проведенной терапии.

В качестве результата для количественного теста станет считаться количественная оценка результатов по образцу, указанному выше. В результате будет вынесен вердикт «ниже измеряемого диапазона» или «в крови не обнаружено» — это является нормой для здорового человека.

Параметр чувствительности качественного теста обычно ниже, чем чувствительность количественного анализа. Расшифровка «Отсутствующий» показывает, что оба вида анализов не нашли РНК вируса. При показателе теста «ниже измеренного диапазона» анализ количественного типа, скорее всего, не нашел РНК гепатита, хотя это подтверждает наличие вируса с очень маленьким удельным содержанием.

Гепатит C и его генотипы

Генотипирование РНК вируса гепатита C диагностирует присутствие разных генетических типов гепатита С.

Науке известно более 10 типов генома вируса, но для медицинской практики достаточно выделить несколько генотипов, имеющих наибольший удельный вес в регионе.

Определение генетического типа играет ключевую роль при выборе сроков лечения, что очень необходимо, если принять во внимание обширный спектр побочных эффектов лекарств от гепатита.

Способы лечения

Единственным действенным способом вылечить вирус гепатита С, как правило, оказывается сочетание 2-х медпрепаратов:

По отдельности эти лекарства не так эффективны. Рекомендуемые дозировки лекарств и сроки применения должны назначаться только врачом и индивидуально каждому пациенту. Лечение этими лекарствами может растянуться на срок от 6 до 12 месяцев по первой схеме и от 3 до 6 месяцев по второй и третьей схеме.

Сегодня не изобретено препаратов, гарантирующих стопроцентное выздоровление от вируса. Однако при верно подобранном лечении исцеление пациентов может достигать до 98% от числа заболевших.

Источник: https://ogepatite.ru/c/rnk-virusa-gepatita-c.html

Рнк вируса гепатита с не обнаружено: что это значит?

«Выявление генов вируса гепатита С (HVC) в крови пациента является вторым этапом лабораторной диагностики этой инфекционной патологии.

Чтобы обнаружить возбудителя, который не имеет клеточной мембраны и, соответственно, поверхностных антигенов, используют метод полимеразной цепной реакции.

С помощью этого метода определяют непосредственно молекулу, в которой закодирована вся его генетическая информация — РНК.

Содержание Что это значит? Анализ на РНК вируса гепатита С Рнк вируса гепатита с: метод пцр Рнк гепатита с: качественный анализ Рнк гепатита с: количественный анализ Гепатит С: анализы и расшифровка

                                                                                                          РНК — Рибонуклеиновая кислота, наряду с ДНК входит в состав клеток всех живых организмов. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет способность к ее мутациям.

Исследование на наличие генома HVC назначают обычно после того, как проводят общий, биохимический анализ крови и получают положительный ответ на антитела (anti-HVC).

Что это значит?

Если человек никогда не заражался гепатитом С.

Если чувствительность лабораторной тест-системы оказалась ниже, чем концентрация anti-HVC.

Если инфицирование произошло менее 2 месяцев назад и anti-HVC в крови еще недостаточно для определения. При ложноотрицательном ответе по причине человеческого фактора.

Если же получен результат, что антитела к HVC у больного обнаружены, это значит, что вирус гепатита С находился в организме обследуемого на момент проведения исследования или был в крови некоторое время назад.

При положительном результате на anti-HVC возникает необходимость проведения дополнительных лабораторных исследований, которые обнаружат генетический материал самого возбудителя, определят концентрацию его генов (вирусную нагрузку, виремию) и установят генотип.

Анализ на РНК вируса гепатита С

Геном HVC в лабораторных условиях можно обнаружить с помощью нескольких исследований:

• разветвленной ДНК (р-ДНК);
• транскрипционной амплификации (ТМА);
• полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Метод транскрипционной амплификации обнаруживает в сыворотке крови нуклеиновые кислоты вируса. Анализ имеет высокую чувствительность (5-10 МЕ/мл), но он еще недостаточно внедрен в повсеместную лабораторную практику.

Метод ПЦР в России является самым распространенным и доступным лабораторным обследованием с высокой чувствительностью (от 50-60 МЕ/мл).

Исследование ПЦР выполняется в любой клинической лаборатории, имеющей соответствующую аккредитацию. Очень важным нюансом этого метода диагностики, который влияет на результат анализа, является чувствительность используемой в лаборатории тест-системы.

Например, чувствительность диагностикума 60 МЕ/мл, как в лабораториях «Инвитро», позволяет обнаруживать вирусную РНК спустя 3 месяца после заражения.

При низкой чувствительности тест-системы гены возбудителя могут не обнаруживаться даже спустя 4 месяца после инфицирования.

Рнк вируса гепатита с: метод пцр

Метод ПЦР имеет множество преимуществ перед другими лабораторными исследованиями для обнаружения генов HVC:

• высокая чувствительность. Метод позволяет определять генетический материал возбудителя даже при его минимальной концентрации в образце;
• большая специфичность. Выявляет гены вируса определенного генотипа среди множества ДНК и РНК других возбудителей, что позволяет проводить генотипирование возбудителя;
• быстрота проведения. Отсутствие длительного процесса культивирования возбудителя сокращает время получения результата до нескольких часов; универсальность анализа.

Универсальная процедура проведения исследования позволяет одновременно использовать один образец крови человека для обнаружения генетического материала разных возбудителей. Эти преимущества позволяют считать ПЦР «золотым стандартом» лабораторной диагностики вирусного гепатита С вместе с иммуноферментным анализом на anti-HVC.

ПЦР — это исследование, используемое для определения генов HVC в крови обследуемого человека. Исследование состоит из нескольких этапов:

• Отбора образца биоматериала.
• Многократного увеличения концентрации копий РНК в отобранном образце.
• Обнаружения генетического материала с помощью специальных тест-систем.

После забора венозной крови у пациента проводят искусственное инициирование процесса множественного реплицирования (амплификации, копирования) генов HVC.

Для этого определенным способом несколько раз изменяют температуру внутри пробирки с биоматериалом. Когда количество копий РНК в пробирке достигает необходимого значения, проводят обнаружение возбудителя с помощью специальных тест-диагностикумов.

ПЦР-диагностика бывает

• качественной (обнаруживает присутствие вируса),
• количественной (определяет концентрацию вирусных генов в единице объема)
• генотипической (устанавливает генотип возбудителя).

Рнк гепатита с: качественный анализ

Задача качественного ПЦР — определение наличия HVC в представленном биоматериале. Это исследование проводится обычно для скрининговой диагностики заболевания или выявления носительства. Назначают его после того, как выявят anti-HVC методом ИФА.

Чтобы поставить диагноз гепатита С, достаточно обнаружить генетический материал HCV качественно, то есть без подсчета его концентрации в объеме крови. Результатом качественного ПЦР может быть: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено».

syringe needle with droplet of blood in front of a finger and on blue bacjground

Точность метода соответствует 95%. При этом точность самих тест-диагностикумов достигает 100%, а 5% — это человеческий фактор, который всегда присутствует в лабораторных исследованиях.

Чтобы избежать ложноотрицательного анализа, особенно у людей с низкой виремией, необходима высокая чувствительность применяемой в исследовании диагностической системы.

Чувствительность тест-системы должна быть не меньшей, чем 60 МЕ/мл.

Рнк гепатита с: количественный анализ

Количественный анализ назначают тогда, когда нужно знать уровень виремии в организме человека. Показаниями для проведения этого исследования являются:

• положительный результат качественного ПЦР при условии обнаружения антител к вирусу;
• установление стадии патологии;
• определение вирусной нагрузки при гепатитах;
• выбор комбинации противовирусных препаратов;
• мониторинг вирулогического ответа на проводимую противовирусную терапию;
• оценка вероятности перехода острого гепатита С в хронический.

Результат анализа выражается в МЕ/мл (международных единицах в 1 мл сыворотки) или в копиях/мл (количестве копий генов вируса в 1 мл сыворотки). Количественный ПЦР не имеет нормы: в норме ген HVC в крови человека обнаруживаться не должен. Полученные результаты обследования сравнивают с референсными значениями, установленными для той или иной степени вирусной нагрузки.

Так, показатели (в МЕ/мл):

• ниже 4×10*5 считаются низкой виремией;
• от 4×10*5 до 8×10*5 — средней;
• свыше 8×10*5 — высокой.

Чем больше копий вирусной РНК в крови, тем агрессивнее протекает заболевание и больше риск передачи вируса окружающим. Но уровень вирусной нагрузки — не единственный показатель, влияющий на тяжесть течения патологии и дальнейший прогноз для пациента: важен также генотип возбудителя.

Установление генотипа необходимо для назначения правильной схемы лечения. От него также зависит прогноз для здоровья и жизни пациента. Например, вирус 3 генотипа чаще приводит к фиброзу или циррозу печени, в сравнении с пациентами носителями 1 генотипа.

Гепатит С: анализы и расшифровка

РНК Диагноз гепатита С невозможно поставить только по результатам только качественного и/или количественного анализа ПЦР: определения HVC и уровня вирусной нагрузки недостаточно для назначения адекватной противовирусной терапии.

Потенциального больного нужно обследовать комплексно (клинически, лабораторно, инструментально), чтобы иметь объективную картину патологии.

Правильно назначить комплекс обследований для установления диагноза гепатита С, а затем грамотно расшифровать полученные результаты может только врач.

Источник: https://Sofosbuvir-Daclatasvir.ru/article-item/rnk-virusa-gepatita-s/

Рнк вируса гепатита с не обнаружено — что это значит?

Вирусный гепатит С является заболеванием, передающимся через кровь. Это означает, что основными методами диагностики данного заболевания являются аналитические исследования данной биологической жидкости.

Но что означает «РНК гепатита С не обнаружено»? Каковы особенности качественного анализа на РНК HCV? Как проводится это тестирование? Ответы на эти вопросы вы сможете найти в нашей статье.

Для первичной диагностики гепатита С используются данные, полученные в процессе качественного анализа. Этот диагностический метод относится к наиболее точным и в настоящее время считается одним из лучших способов определения наличия в крови пациента возбудителя вирусного воспаления печени. Результаты анализа могут быть следующими:

• РНК гепатита С не обнаружено. Что это значит? Это означает, что фрагментов патогенной рибонуклеиновой кислоты в исследуемом образце крови нет. Такой результат может говорить о том, что обследуемый здоров.
• РНК гепатовируса обнаружено. Такой результат может говорить о наличии патогена в организме человека. Но болезнь не обязательно находится в активной форме (возможно, что вы являетесь носителем вируса или на данный момент инкубационный период).

Важно заметить, что на документальном носителе результатов подобных анализов нередко можно найти сокращение «кач.». Его наличие говорит о том, что врачами было произведено именно качественное обследование. Отсутствие обозначения говорит о том, что диагноз выявлялся количественным или каким-либо иным способом.

Таким образом, если РНК не обнаружено, гепатита С в организме обследуемого, скорее всего, нет. Однако рекомендуется пройти дополнительную диагностику, так как возможны и ложные результаты.

Исследование проведено при поддержке научно-исследовательского института индийского фармацевтического производителя Zydus Heptiza. Официальный сайт в России Zydus.ru

Вирусный гепатит С относится к типу заболеваний с осложненной диагностикой.

Проблема в том, что в большинстве случаев заболевание проявляется бессистемно, ярких симптомов не наблюдается, и пациент может попросту не подозревать о своем недуге.

Обследование основывается на полимеразной цепной реакции (ПЦР). Суть его заключается в эксплуатации специфических ферментов, имитирующих РНК ВГС. В процессе исследования изучается реакция образцов крови пациента на эти ферменты. Это позволяет выявить наличие и концентрацию патогена.

Преимуществами анализа на выявление элементов вирусного РНК являются:

• Точность метода. Погрешность в результатах, в случае соблюдения лабораторными работниками самим обследуемым всех необходимых мер, сведена к минимуму.
• Оперативное получение результатов диагностики. Результат анализа предоставляется в течение 6-7 часов после явки пациента в лабораторию. Даже с учетом очередей на сдачу крови, обследуемый очень быстро узнает, найдены ли в его крови фрагменты вирусной РНК.
• Высокая чувствительность. Это означает, что даже при небольшой концентрации искомого материала в крови больного РНК без труда обнаруживается.
• Невысокая стоимость. Данный анализ по цене не отличается от других, менее информативных методов. В совокупности с надежностью и скоростью реакции, качественный метод ПЦР остается наиболее востребованным вариантом определения гепатовируса.

Однако некоторые нюансы необходимо принимать в расчет. В первую очередь, пациенту рекомендуется обращаться только в те медицинские учреждения, в штате которых трудятся специалисты высокого уровня. Из-за чувствительности реагентов малейшая неточность в работе лаборанта приводит к ложноположительным или ложноотрицательным результатам.

Также необходимо понимать, что у каждого аппаратного оборудования есть нижний предел чувствительности к реагентам.

Это означает, что если возбудитель вирусного воспаления печени пребывает в крови больного в чрезвычайно низкой концентрации, даже такой точный метод, как ПЦР, может не выявить его РНК.

Если у пациента или лечащего врача сохраняется подозрение на заражение ВГС, рекомендуется через некоторое время пройти повторную диагностику.

Для того чтобы наверняка выявить наличие или отсутствие РНК вируса гепатита С в образцах крови пациента, материал должен быть максимально пригодным для обследования. Это невозможно без соблюдения пациентом следующих норм:

• Отказ от жирной и тяжелой пищи накануне сдачи крови
• Отказ от курения и распития алкогольных напитков
• Отказ от любой пищи в течение последних 8 часов и сдача образца биологической жидкости натощак
• Явка в лабораторию в раннее время суток

Следует отметить, что качественный анализ на обнаружение РНК гепатита С назначается не во всех случаях. Врач может порекомендовать его проведение, если:

• Обнаружены иммуноглобулины ВГС в крови больного
• Вирус гепатита С обнаружен, но иммуноглобулины не выявлены
• Проводилась противовирусная терапия, и требуется выявить уровень РНК ВГС для мониторинга ее эффективности

В первых двух случаях анализ на проверку РНК HCV качественный предписывается только после сероконверсии. В случае, если антитела к антигенам ВГС не обнаруживаются, можно понять, что вирус в организме присутствует, но по каким-либо причинам не получает иммунологического отклика.

При наличии иммуноглобулинов анализ позволяет установить, необходимо ли медикаментозное лечение, или организм может справиться сам.

Итак, чтобы уметь расшифровывать качественный анализ ПЦР до прибытия к лечащему врачу, необходимо запомнить, что может быть 2 варианта результата:

• РНК гепатита С не обнаружено. Что это значит? Патогена в крови исследуемого не обнаружено. Либо он полностью отсутствует, либо его концентрация ничтожно мала. РНК не обнаружено — что это значит? Скорее всего, пациент здоров. В любом случае, лечение не требуется.
• Фрагменты РНК обнаружены. Положительный результат, вирус присутствует в крови исследуемого. Для точного определения патогенной нагрузки рекомендуется пройти количественный ПЦР-тест. Если уровень заражения не снизился в процессе противовирусной терапии, лечащий врач должен переосмыслить схему лечения и внести в нее коррективы.

Важно помнить: если инфицирование подтверждено, следует незамедлительно приступить к терапевтическим мерам.

Промедление в лечении ВГС грозит тяжелыми последствиями. Самолечением заниматься не следует. Определить подходящую терапию может только лечащий врач.

Источник: https://gepatit-abc.ru/rnk-virusa-gepatita-s-ne-obnaruzheno-chto-eto-znachit/

HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]

[09-010] HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]

1110 руб.

• Молекулярно-генетическое исследование для определения генотипа вируса гепатита С.
• Применяемый набор реагентов может быть использован для диагностики вируса гепатита С и наиболее распространенных на территории России генотипов HCV (1a, 1b, 2, 3a и 4) in vitro.
• Синонимы русские
• Вирус гепатита С (ВГС).
• Синонимы английские
• Hepatitis C Virus (HCV) Genotyping, HCV Subtype.
• Метод исследования
• Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.
• Какой биоматериал можно использовать для исследования?
• Венозную кровь.
• Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (ВГС) способен поражать клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты). В основном инфекция передается через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже вероятно заражение половым путем.

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остается невыявленным. У 60-85  % инфицированных развивается хроническая инфекция, которая увеличивает риск развития цирроза, печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы. За свое скрытое, но разрушительное действие инфекция получила неофициальное название «ласковый убийца».

ВГС обладает наибольшей вариабельностью среди всех возбудителей вирусных гепатитов и благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Геномы вируса значительно отличаются в разных странах мира и имеют различную чувствительность к препаратам интерферонов.

Существует 6 основных генотипов вируса гепатита С и около 500 субтипов. Наиболее распространен в мире генотип 1 (40-80  %). 1а тип часто выявляется в США, 1b характерен для Западной Европы и Южной Азии. Генотип 2 встречается с частотой 10-40  %.

Генотип 3 распространен в Шотландии, Австралии, Индии и Пакистане. ВГС 4 типа характерен для Средней Азии и Северной Африки, генотип 5 – для Южной Африки, 6 – для некоторых стран Азии.

В России преобладает генотип 1b, далее с убывающей частотой — 3, 1a, 2, в США – 1a/1b, 2b, и 3a.

Противовирусная терапия, направленная на подавление прогрессирования заболевания, в редких случаях может ускорить развитие осложнений со стороны печени. Это происходит при неправильной оценке клинических и лабораторных показателей. Генотипирование РНК вируса гепатита С позволяет спрогнозировать эффект от планируемой терапии.

Курс терапии у таких пациентов должен быть продлен до 48 недель даже при отсутствии вируса в крови более 24 недель. В случае успешности лечения, которая подтверждается снижением вирусной нагрузки крови (< 50 МЕ/мл за 4 недели), вероятен более короткий срок терапии.

Если количество вирусных копий не снизилось на 2 порядка за 12 недель, значит, лечение неэффективно и его необходимо пересмотреть.

1. Генотипы 2 и 3 хорошо поддаются терапии в 80  % случаев, обычно это занимает 24 недели.
2. Лечение разрабатывается с учетом пола и возраста пациента, присутствующих у него симптомов, ранее проводимой терапии, структуры и функции печени, а также лабораторных показателей.
3. Для чего используется исследование?

• Чтобы определить необходимость лечения и спрогнозировать течение заболевания.
• Для планирования длительности противовирусной терапии и дозировки лекарств.
• Для прогнозирования эффективности лечения.
• Для принятия решения о биопсии печени.

Когда назначается исследование?

• При обнаружении РНК вируса гепатита С и планировании противовирусной терапии.

• Что означают результаты?
• Референсные значения: РНК HCV не обнаружена.
• При обнаружении указывается генотип:

Что может влиять на результат?

• Генотип вируса гепатита С иногда не выявляется при концентрации вируса в крови менее 1,25*10^3 МЕ/мл.

Важные замечания

• Решение о длительности терапии, необходимой дозе препаратов и прекращении лечения может принять только лечащий врач на основании биохимических анализов функции печени, биопсии (при необходимости) и вирусной нагрузки.
• Существует вероятность повторного заражения вирусным гепатитом С другого генотипа из-за отсутствия перекрестного иммунного ответа и стойкого иммунитета.

1. Также рекомендуется
2. Кто назначает исследование?
3. Инфекционист, гепатолог.
4. Литература

• Возианова Ж. И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000 – Т.1.: 600-690.
• Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.:ООО МИА, 2006 – 471-476 с.
• Germer J., Mandrekar J., and others. Hepatitis C Virus Genotypes in Clinical Specimens Tested at a National Reference Testing Laboratory in the United States. J Clin Microbiol. 2011 August; 49(8): 3040–3043. PMCID: PMC3147781.
• Kuzin S., Samokhvalov E., Zabotina E, and others. Hepatitis virus genotype structure in patients with chronic hepatitis C. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 2011 May-Jun;(3):33-8. PMID:21809642.
• Mahaney K, Tedeschi V, Maertens G, et al, “Genotypic Analysis of Hepatitis C Virus in American Patients,”Hepatology, 1994, 20(6):1405-11. PubMed 7982639.
• Paintsil E, Verevochkin SV, and others Hepatitis C virus infection among drug injectors in St Petersburg, Russia: social and molecular epidemiology of an endemic infection.Addiction. 2009 Nov;104(11):1881-90. Epub 2009 Aug 27. PMID:19712125.

Источник: https://helix.ru/kb/item/09-010

Методы исследования вирусов гепатита

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела.

Метод обнаружения с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого .

В этом случае из двух компонентов реакции (антитело, антиген) неизвестным является сыворотка крови, так как постановка реакции проводится с заведомо известными антигенами. Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в крови антител, соответствующих применяемому антигену; отрицательный результат указывает на отсутствие таковых.

Достоверные результаты получают при исследовании «парных» сывороток крови больного, взятой вначале заболевания (3-7 день) и через 10-12 дней. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител. При вирусных инфекциях лишь четырехкратное и более повышение титра антител во второй сыворотке имеет диагностическое значение.

С внедрением в практику лабораторий метода иммуноферментного анализа (ИФА) стало возможным определять в крови больных антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов (JgM и JgG), что существенным образом повысило информативность серологических методов диагностики.

При первичном иммунном ответе, когда иммунная система человека взаимодействует с инфекционным агентом в первый раз, синтезируются преимущественно антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М (JgM).

Лишь позднее, на 8-12-й день после попадания антигена в организм, в крови начинают накапливаться антитела иммуноглобулинов класса G (JgG).

При иммунном ответе на инфекционные агенты вырабатываются также и антитела класса А (JgA), которые играют важную роль в защите от инфекционных агентов кожи и слизистых оболочек.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы.

Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать.

Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеинов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется.

ПЦР — это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

Преимущество ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний перед другими методами исследований заключается в следующем:
• возбудитель инфекции может быть обнаружен в любой биологической среде организма, в том числе и в материале, получаемом при биопсии;
• возможна диагностика инфекционных болезней на самых разных стадиях заболевания;
• возможность количественной оценки результатов исследований ( сколько вирусов или бактерий содержится в исследуемом материале);
• высокая чувствительность метода.

Исследования вирусов гепатита

В настоящее время выделяют следующие формы вирусных гепатитов: гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D, гепатит Е, гепатит G и гепатит ТТ. Для диагностики каждой из перечисленных форм вирусных гепатитов используется определенный перечень маркеров.

Вирусный гепатит А

Гепатит А — острая энтеровирусная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита А (ВГА,HAV) — энтеровирус типа 72. Геном вируса представлен однонитчатой РНК. Вирус гепатита А содержит единственный антиген (HA-Ag).

Удельный вес гепатита А в суммарной заболеваемости вирусными гепатитами составляет 70-80%.

В структуре заболеваемости гепатитом А дети составляют до 80%, причем основная масса — дошкольники и школьники начальных классов.

ИФА и ПЦР исследования при гепатите А

Вирусный гепатит В

Гепатит В – вирусная антропонозная инфекция. Возбудитель вирус гепатита В (ВГВ, HBV) – относится к семейству гепаднавирусов, ДНК-содержащих вирусов, поражающих клетки печени. Вирионы ВГВ имеют наружную липопротеидную оболочку и нуклеокапсид, содержащий двунитчатую ДНК и ДНК-зависимую ДНК-полимеразу.

В структуре ВГВ (HBV) выделяют следующие антигенные системы:
• поверхностный («австралийский») антиген, HBsAg, находящийся в составе липопротеидной оболочки ВГВ, является маркером ВГВ, указывая на инфицированность вирусом;
• ядерный (core), HBcAg – обнаруживается в составе нуклеокапсида вирионов, свидетельствует об активной репродукции вируса;
• HBeAg – входит в состав ядра ВГВ, указывая на активность вируса и, кроме того, на его высокую вирулентность и инфицированность;
• HBxAg – расположен вблизи оболочки вириона, его роль в генезе инфекции изучается.

В диагностике вирусного гепатита В ведущее значение имеет определение комплекса маркеров гепатита. Свыше 5% населения планеты охвачено этой инфекцией, а частота безжелтушных форм ВГВ составляет, по данным разных авторов, от 60 до 82%.

ИФА и ПЦР исследования при диагностике вируса гепатита В

Вирус гепатита С, генотипы

Гепатит С (ВГС) – вирусное заболевание, наиболее часто протекающее в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием безжелтушных и легких форм и склонное к хронизации процесса.

Возбудитель — вирус гепатита С – имеет сходство с флавовирусами, содержит РНК. На основе филогенетического анализа выделено 6 генотипов ВГС и более 80 субтипов.

Генотип 1 — наиболее распространенный генотип во всем мире (от 40 до 80%). Генотип 1а является доминирующим для США, а 1b преобладает в Западной Европе и Южной Азии.

Генотип 2 распространен во всем мире, однако встречается с меньшей частотой, чем генотип 1 (от 10 до 40%).

ВГС тип 3 характерен для Индии, Пакистана, Австралии и Шотландии. Генотип 4 распространен преимущественно в Средней Азии и Египте, генотип 5 – в Южной Африке, а генотип 6 – в Гонконге и Мокао.

Примерно 90% всех случаев посттрансфузионных гепатитов связано с ВГС. Среди доноров антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС) обнаруживают в 0,2-5% случаев.

У 40-75% пациентов регистрируется бессимптомная форма болезни, у 50-75% больных острым ВГС формируется хронический гепатит, у 20% из них развивается цирроз печени. Важная роль ВГС отводится и в этиологии гепатоклеточной карциномы.

Отличительной чертой ВГС является волнообразное течение заболевания, в котором разграничивают 3 фазы: острую, латентную и фазу реактивации. Для острой фазы характерно повышение активности печеночных ферментов в сыворотке крови, уровня антител класса IgM и IgG к ВГС с нарастанием титров, а также РНК ВГС.

Латентная фаза характеризуется отсутствием клинических проявлений, наличием в крови антител класса IgG к ВГС в высоких титрах, отсутствием антител класса IgM и РНК ВГС либо их присутствием в низких концентрациях на фоне незначительного повышения активности печеночных ферментов в периоды обострения. Для фазы реактивации характерно появление клинических признаков, повышение активности печеночных ферментов, наличие антител класса IgG (к нуклеокапсидному белку core и неструктурным белкам NS) в высоких титрах, присутствие РНК ВГС и нарастание титров антител класса IgM к ВГС в динамике.

ИФА и ПЦР исследования на вирус гепатита С, определение генотипа

Вирусный гепатит D

Гепатит D – вирусная инфекция, вследствие биологических особенностей вируса протекающая исключительно в виде ко- или суперифекции при гепатите В, характеризующаяся тяжелым течением, часто неблагоприятным исходом.

Самостоятельно, без вируса В, вирус гепатита D не может попасть в организм человека

Возбудитель – вирус гепатита D (ВГD), по своим биологическим свойствам приближается к вироидам – обнаруженным молекулам нуклеиновых кислот. Печень человека – единственное место размножения (репликации) ВГD.

Известно существование двух вариантов инфекции: коинфекция (одновременное заражение ВГВ и ВГD) и суперинфекция (заражение HBsAg-позитивных пациентов). Сочетание ВГВ и ВГD сопровождается развитием более тяжелых форм патологического процесса, что определяется главным образом действием ВГD.

Летальность при суперинфекции достигает 15-20%. Инфицирование дельта-вирусом может вызывать острое заболевание, заканчивающееся выздоровлением, или формировать хроническое носительство ВГD.

При гепатите D могут отсутствовать в крови маркеры гепатита В – анти НВс и НВs-антиген – и наблюдается угнетение ДНК-полимеразной активности, так как ВГD ингибирует репликацию вируса гепатита В.

ИФА и ПЦР исследования на вирус гепатита D

Источник: https://www.gepatit.ru/ifa-pcr/